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动漫《火影忍者》中大蛇丸死了两次，第一回是佐助杀死的（334集）、第二回被鼬杀死（358集）。在第334集剧情里，大蛇丸的真身出现啦，并且不断的袭击佐助，佐助开启了咒印的力量，将无数条小蛇一一斩杀，在佐助面前，曾经羞辱过自己的大蛇丸现在简直不堪一击。
大蛇丸曾一度因研究转生之术被发现，企图占有鼬的身体失败，这些经历迫使他不得不选择对还是雏鸟的佐助动手，结果身为雏鸟的佐助如今终于成为一只猎鹰，开始了他的复仇之路。在第358集剧情里，年幼的佐助回到从前的家中，看到父母死后残留的血迹不禁情绪崩溃，为了向鼬复仇，多年来佐助怀着憎恨的心获得了强大的力量，如今复仇的时刻终于来临了。
伴随着一阵雷鸣，鼬被佐助自创的忍术麒麟击倒，但他并没有死去，反而展现了他的必杀技须佐能乎。见识到须佐能乎的佐助已经没有多余查克拉可以应战了，就在这时，被佐助吞噬的大蛇丸再次出现了，但天不依人愿，大蛇丸刚复活就被鼬的十拳剑封印，保命用的小白蛇也被鼬的天照烧死。
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