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Leon Scott Kennedy|里昂·斯科特·肯尼迪 配音：Matthew Mercer|马修·麦瑟(英语)；森川智之(日语)；本作三大主角之一，36岁。《生化危机》系列的主要角色，曾担任2代、4代的主角。美国总统的的直属特工，原本是一名警察，“浣熊市事件”之后他与美国政府在一个未公开的交易中以自己为代价，换取了美国政府保证雪莉·柏金的安全。在成功完成多次危险任务后，他的能力得到美国政府的认可，并且备受总统信赖，后来成为DSO（安全维和组织）的发起人之一。2013年，里昂再次被卷入了一场生化恐怖袭击中，面对一直提拔自己的老朋友——已经变异成丧尸的现任美国总统亚当·本福德，他不得不做出个人生命中最艰难的决定。 特殊武器/能力：“羽翼射手”半自动双枪——切换双枪模式施展连续快速射击能将敌人打至浮空，动作华丽帅气，对杂兵控场能力一流。
Helena Harper|海伦娜·哈伯 配音：Laura Bailey|劳拉·贝利(英语)；佐古真弓(日语) 游戏中里昂的搭档，24岁。和里昂一样，海伦娜也是一名美国政府的特工。作为一名联邦探员，海伦娜拥有极强的道德感，从不推卸责任，但这也导致她时不时会被自己的情绪所左右。在同僚当中，她的能力出类拔萃，并曾是特工机构招募DSO特工的候选人首选，生化恐怖袭击事件发生之时她被USSS（美国特勤局）调往担任总统警卫。妹妹黛博拉·哈伯是她在世上唯一的亲人，正是由于她在情绪控制上的弱点和对妹妹的溺爱，使得她成为西蒙斯暗杀总统计划中的一枚棋子。 特殊武器/能力：“九头蛇”霰弹枪——连续快速射击华丽且实用，子弹射完后自动一次性上膛，能将“最后一发子弹”技能的作用发挥到极致。
Chris Redfield|克里斯·雷德菲尔德；配音：Roger Craig Smith|罗杰·克雷格·史密斯(英语)；东地宏树(日语)；本作三大主角之一，39岁。《生化危机》系列的主要角色，曾担任1代、5代的主角。BSAA北美支部Alpha小队队长，原S.T.A.R.S.成员，曾在美国空军服役，后加入BSAA组织（生化恐怖防御与评估联盟），成为创始11人之一。故事开始半年前，在东欧战场上平定变种叛军的克里斯遭受暗算并丧失记忆，后来被皮尔斯在一家酒馆中寻获而重新加入BSAA。2013年，在中国——这个世界人口最多最密集的地方，发生了大规模的生化恐怖袭击事件，虽然最开始心里摇摆不定，克里斯最终还是决定前往这个东方大国。 特殊武器/能力：战斗匕首——装备后部分体术伤害值暴涨，快速连刀技巧效果拔群，高端玩家手中的神器。
Piers Nivans|皮尔斯·奈文斯，配音：Christopher Emerson|克里斯多夫·艾默生(英语)；阪口周平(日语)；游戏中克里斯的搭档，26岁。和克里斯一样，皮尔斯同属BSAA北美支部。作为一名天才狙击手，皮尔斯拥有着优秀的动态视力和集中力。他出生于军人世家，自记事起便想追随父亲的脚步，成为一名出色的军人。军校毕业后，他成为了一名特种兵，然而此时的他却渐渐地迷失了自己的信仰，直到他遇见了克里斯，并受邀加入BSAA后才重新找回了自己的人生目标。对于克里斯队长，皮尔斯一向对他保持着最高的敬意，而克里斯对他也十分地信任，并希望他将来能成为自己的接班人。 特殊武器/能力：反器材狙击步枪——配备有热能感应装置，能看到黑暗或烟雾中的敌人，可用切枪和换边来大幅度提升攻击速度。
Jake Muller|杰克·穆勒，配音：Troy Baker|特洛伊·贝克(英语)；浪川大辅(日语)；本作三大主角之一，20岁。出身于一个没有父亲的单亲家庭，母亲患有慢性病，并不富裕的家境使得他的母亲迟迟得不到彻底的治疗而无法痊愈。杰克长大后，为了让母亲能接受更好的治疗，成为了一名反政府武装的战士。只可惜，在杰克成为雇佣兵后不久，他的母亲就因病去世了。从此以后，杰克变得对金钱异常执着。一天，他的面前出现了一名金发女子——雪莉·柏金，她告知杰克他拥有拯救世界的可能性。虽然听起来很荒谬，杰克还是以五千万巨额现金作为交易条件接受了雪莉的保护。在逃亡的过程中，一个骇人听闻的真相突然向他袭来，他的身体中流淌着阿尔伯特·威斯克那“被诅咒的血”的事实。特殊武器/能力：徒手——蓄力五连击效果出众，冲刺过程中可闪避攻击，操作得当者能仅凭徒手通关最高难度。
Sherry Birkin|雪莉·柏金，配音：Eden Riegel|伊登·里格尔(英语)；坂本真绫(日语)；游戏中杰克的搭档，26岁。她是1998年浣熊市惨剧中，G病毒开发者柏金夫妇的女儿。幸运的是，她在里昂和克莱尔的帮助下从犹如地狱般的小镇中逃出。当时，她的父亲——威廉·柏金在她的体内植入了G病毒胚胎，潜在的威慑让她一直处在美国政府的监控之下。几年之后，作为交换自由的条件她成为了美国特工。不久，雪莉接到了一个艰难的任务——潜入东欧战乱纷飞的伊东尼亚共和国，保护被认为拥有“特殊的血”的男人杰克·穆勒。面前的杰克就像是曾经的自己，而对于从小生活在战乱纷飞地带的杰克来说，雪莉的善良和使命感就像金子一般珍贵。 特殊武器/能力：电击棒——攻击敌人能轻易将其打出硬直状态，蓄力后可提升威力和连段数。
Ada Wong|艾达·王，配音：Courtenay Taylor|考特尼·泰勒(英语)；皆川纯子(日语)；本作的隐藏主角，年龄、真实姓名、所属组织、目的均不详的自由国际间谍。1998年的浣熊市惨剧中，她出现在了里昂的面前，当时她的任务是夺取雪莉·柏金的父亲——威廉·柏金博士开发的最新型生化病毒——G病毒。自此，她与里昂之间复杂的关系一直成为生化迷们津津乐道的话题。在本作中她是所有故事的主要起因，串连前面三组主角的故事和结局。 特殊武器/能力：十字弩——可切换普通箭和爆炸箭，快速射击动作优雅且能自动装填，并且使用弩箭杀敌不会触发警报。
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Derek C. Simmons|德雷克·C·西蒙斯，配音：David Lodge|大卫·洛奇(英语)；菅生隆之(日语)；美利坚合众国首席国家安全顾问，46岁。一个性格残忍的完美主义者，神秘组织“家族（Family）”的领导人。该组织一直致力于维护自己所倡导和营造的社会秩序及稳定，并为此不择手段，不计代价。由于担心总统公布“浣熊市事件”真相可能造成的混乱而策划了生化恐怖袭击杀害了总统。
Adam Benford|亚当·本福德，配音：Michael Donovan|迈克尔·多诺万(英语)；佐佐木胜彦(日语)；美国现任总统，他是阿什莉父亲之后的下一任总统。在常春藤大学的演讲中计划将当年“浣熊市事件”的真相公布于众，结果在演讲当天发生了一场大规模的生化恐怖袭击，自己也变成了丧尸，最后被里昂射杀。
Ingrid Hunnigan|英格莉·哈尼根，配音：Salli Saffioti|莎莉·西菲奥迪(英语)；杉本优(日语)；FOS（外勤行动支援部）的情报人员，33岁。曾在4代、恶化、诅咒中登场，她和里昂已经共事很久，彼此之间十分信任。本作与4代一样都是负责提供各种情报给里昂。
Carla Radames|卡拉·拉达梅斯，配音：同艾达·王；今次事件的主谋，“新安布雷拉”（Neo Umbrella）的领导人。15岁时就成功取得了遗传学博士学位，并被西蒙斯基金会下辖的研究机构雇佣，后来成为C病毒的主要开发者。爱上了西蒙斯但却被当作克隆艾达的实验品，在经C病毒的作用下基因重组之后变成了外表酷似艾达的克隆人，因此深深憎恨着西蒙斯，表面上遵从他的指令，暗中却制定了毁灭世界的疯狂计划。