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碘伏的主要作用是消毒、杀菌，其应用非常广泛，由于碘伏具有刺激性小的特点且具有广泛的杀菌、消毒作用，因此更容易被患者接受。碘伏在稀释时多用无菌水、蒸馏水或洁净水，在紧急条件下也可用瓶装的矿泉水或白开水进行稀释。浓度为0.5%的碘伏可用于男性龟头和女性阴道炎症的擦洗，最常见的浓度为1%，多用于皮肤可用瓶装的矿泉水或白开水进行稀释。浓度为0.5%的碘伏可用于男性龟头和女性阴道炎症的擦洗，最常见的浓度为1%，多用于皮肤外伤消毒或皮下注射前的消毒，可直接用于患处，浓度为2%的碘伏多用于外科手术时对开刀部位进行皮肤消毒。日常生活中不慎受伤都可以采用碘伏进行消毒，刺激小，也无明显痛感和副作用。
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